一、实验原理
硫代乙酰胺(TAA)是经典肝毒性试剂,进入机体后经肝脏代谢活化,产生毒性代谢产物,引发肝细胞氧化应激、炎症浸润、细胞水肿坏死,造成典型急性化学性肝损伤。该模型操作简单、造模周期短、重复性好,广泛用于保肝药物、中药提取物、功能性食材的保肝活性筛选与作用机制研究。
二、实验目的
建立稳定、可重复的TAA 诱导斑马鱼急性肝损伤模型;
评价受试样品(中药复方、单味药、天然提取物、活性单体)对急性肝损伤的保护作用;
结合行为学、组织病理、生化、分子生物学指标,初步探究受试物保肝作用机制。
三、试验方法
TAA 造模浓度与受试物最大耐受浓度(MTC)筛选,设置受试物浓度梯度,单独处理斑马鱼24h,统计存活率,确定最大耐受浓度(100% 存活的最高浓度)。以MTC为基准,设置低、中、高三个给药剂量
1. 分组设置
空白对照组
TAA模型组:200 mg/L TAA;
阳性药物组:200 mg/L TAA+阳性保肝药物
受试物低/中/高剂量组:200 mg/L TAA+对应浓度受试样品。
2. 结果指标
体形态观察活体观察肝脏区域。正常肝脏轮廓清晰、色泽均匀;模型组肝脏肿大、色泽发白、边界模糊。
组织病理学检测肝细胞弥漫性水肿、空泡变性、局部细胞坏死,肝组织见大量炎性细胞浸润;
分子生物学检测氧化应激相关基因sod1、cat、gpx1;炎症相关基因tnf-α、il-1β、il-6;细胞凋亡相关基因促凋亡 bax、caspase-3、抑凋亡 bcl-2
四、实验结果




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