服务项目

视听系统

斑马鱼听觉结构与人同源，依靠毛细胞感知声音，兼具内耳及体表侧线毛细胞，成像操作简便。以新霉素 / 顺铂构建耳损伤模型，DASPEI 染色标记存活毛细胞；幼鱼通体透明，可直接镜检统计毛细胞指标，适用于快速筛选耳保护活性物质。

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1，实验原理

斑马鱼作为脊椎动物，听觉相关结构与人同源，依靠功能性毛细胞实现听觉感知；斑马鱼具备耳泡但无耳蜗，体内存在内耳囊斑、壶腹嵴毛细胞，体表侧线神经丘还分布着可感知水流的浅表毛细胞，取材、荧光成像操作简便。

采用新霉素 / 顺铂构建耳损伤模型，药物会特异性破坏侧线与内耳毛细胞；借助 DASPEI 荧光染色可直观标记存活毛细胞，幼鱼通体透明，显微镜下可直接统计毛细胞数量、荧光面积，是快速筛选耳保护活性物质的经典体内模型。

2，检测指标

（1）毛细胞及侧线神经丘细胞线粒体荧光探针(DASPEI或含2 μmol/L恶唑黄（oxazole yellow，YO-PRO-1）染料)染色；

（2）吖啶橙(AcridineOrange，AO)染色观察细胞损伤情况；

（3）通过观察前耳石距离(AOD)、后耳石距离(POD)、耳石间距(OD)、耳蜗距离(CD)的变化反映耳结构改变；

（4）通过行为轨迹实验及惊吓实验的运动轨迹、移动距离及速度反映斑马鱼的行为学变化；

（5）检测凋亡相关基因(Bcl-2、Bax、Caspase 3、Caspase9)的 mRNA 相对表达量；

（6）免疫荧光检测毛细胞标志物 otoferlin 。

3，实验结果

模型组斑马鱼侧线毛细胞大量丢失，听觉应激反应减弱；受试物处理后可显著增加存活毛细胞数量，上调毛细胞发育基因、下调凋亡相关基因，恢复听觉相关运动行为，证明样品具备抗耳损伤、听力保护活性。

4，阳性对照药品

Tyrphostin AG490

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参考文献：

【1】耳聪通窍颗粒治疗获得性感音神经性聋的临床疗效评价及其机制研究[D].吉林大学, 2024. DOI:10.27162/d.cnki.gjlin.2024.000660.