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代谢相关

斑马鱼肠炎模型

1. 实验原理（TNBS）诱导斑马鱼胃肠粘膜损伤模型。炎症性肠病(IBD)是由肠道免疫系统和微生物群之间的功能失调相互作用引起的，受宿主遗传易感性的影响。由于病

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服务概述

1. 实验原理

（TNBS）诱导斑马鱼胃肠粘膜损伤模型。炎症性肠病(IBD)是由肠道免疫系统和微生物群之间的功能失调相互作用引起的，受宿主遗传易感性的影响。由于病理的一个关键特征是肠上皮损伤，因此传统上在小鼠化学结肠炎模型的背景下分析潜在的疾病因素。斑马鱼在疾病过程建模方面大大补充了小鼠，具有高含量药物筛选的优势。暴露于半抗原化剂(TNBS)的幼斑马鱼表现出肠道内稳态受损和炎症，与人类IBD相似。

斑马鱼肠道可分为前、中、后 3 段，肠壁由内向外分为黏膜层、肌层和浆膜层。细胞水平结果表明：斑马鱼肠道执行消化吸收的主要场所在前肠，肠道黏膜免疫机能与免疫细胞位置的分布相关。斑马鱼的肠道在发育、组织和功能上与哺乳动物肠道高度同源，肠上皮细胞中的基因表达和转录调控与哺乳动物高度保守，代谢功能也保守。斑马鱼在受精后5天消化系统基本发挥功能，是研究肠道炎症和损伤基本过程的重要模式生物。肠道上皮细胞能够消化并吸收食物中的营养，同时肠道上皮细胞中的杯状细胞、肠内分泌细胞、干细胞等紧密连接形成肠道屏障，阻止病原体、毒素和过敏原等从肠腔扩散到组织，而肠道屏障的完整性遭到破坏则会激活免疫细胞，引发炎症，由此产生炎症性肠病（IBD）。TNBS是诱导IBD的主要化学药物之一，它是一种半抗原，可以与组织蛋白结合并转化为抗原，当其与肠组织蛋白结合形成完全抗原，导致肠粘膜免疫系统针对该抗原产生迟发性变态反应，并造成肠粘膜的损伤。另外，TNBS诱发肠道炎症，募集大量中性粒细胞，上调促炎细胞因子，并通过损害细胞之间的紧密连接来破坏肠道上皮完整性，损伤肠道功能。

可以通过斑马鱼胃肠道病变时出现炎症反应，肠腔扩张状态、中性粒细胞募集到损伤部位，中性粒细胞数目，判断供试品是否具有辅助保护胃肠粘膜功效。

2.试剂配制

阳性对照药物为美沙拉嗪；造模药为TNBS。

3.实验流程及分组

辅助保护胃肠黏膜损伤（胃肠道面积）功效评价

随机选取3 dpf野生型AB品系斑马鱼于6孔板中，每孔（实验组）均处理30尾斑马鱼。除正常对照组外，其余各实验组均水溶给予TNBS建立斑马鱼胃肠粘膜损伤模型。28℃处理48 h后，移除TNBS，分别水溶给予样品，同时设置正常对照组、模型对照组和阳性药组，每孔容量为3 mL。28℃处理48 h后，每组随机选取10尾斑马鱼置于荧光显微镜可见光模式下拍照并保存图片，用Image-Pro Plus 5.1软件分析并采集数据，分析斑马鱼胃肠道面积，以该指标的统计学分析结果评价样品辅助保护胃肠黏膜损伤功效。统计学处理结果采用mean ± SE表示。用SPSS20.0软件进行统计学分析，p < 0.05表明差异具有统计学意义。

4. 评价指标

（1）胃肠道面积（肠腔面积）；

（2）胃肠道病理切片。

5. 阳性对照药：美沙拉嗪

6. 实验结果展现方式

（1）胃肠道面积